产品货号：
KD2176
中文名称：
动物基因组DNA快速提取试剂盒
英文名称：
Tissue gDNA Extract Kit
产品规格：
50T
发货周期：
1～3天
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Biorab动物基因组DNA快速提取试剂盒不含巯基乙醇等刺激性试剂，安全无毒。主要用于提取新鲜或者冷冻的动物组织中的基因组DNA。提取的DNA OD260/280一般在1.8 ～1.9之间，纯度高，不含污染和抑制剂，可以直接用于PCR、酶切、杂交等后续实验。
注意事项：
1.裂解液I和纯化液II容易产生沉淀，纯化液II比较粘稠，用前均需要放置在65℃预热使沉淀溶解、粘稠度降低，用前充分摇匀。
2.自备试剂：氯仿。
(一)样品裂解：
1.贴壁细胞
吸尽培养液，在每10cm2细胞中加入0.8mL预热的裂解液I，用枪充分吹打以确保细胞全部裂解，然后把裂解液转移到1.5mL离心管中。
2.悬浮细胞
离心收集细胞，吸尽液体，在每1～5×106悬浮细胞中加入0.8mL预热的裂解液I，用枪充分吹打以确保细胞全部裂解。然后把裂解液转移到1.5mL离心管中。如果是fibroblasts或carcinoma细胞，细胞使用量不要超过1×106个细胞。
3.新鲜或冷冻的组织
a.匀浆处理：将剪切成小块的新鲜或冷冻保存的组织放入10mL或15mL离心管中，每50～100mg组织加0.8mL预热的裂解液I，用剪切式匀浆器匀浆30 s左右，然后把裂解液转移到1.5mL离心管中。
b.液氮研磨：称取动物组织50～100mg，剪成小块，液氮研磨成粉后，加入已加入0.8mL裂解液I的1.5mL的离心管中。
c.对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA)，建议组织的使用量不要超过50mg。
(二)样品纯化：
1.在步骤(一)所得的约0.8mL的裂解产物中加入0.4mL预热的纯化液II，颠倒数次混匀。(由于纯化液II比较粘稠，可以将1mL枪头剪去一截再吸取)。
2.65℃水浴5～10min。如果室温放置，DNA产量会降低10～20%。
3.加入200μL自备氯仿，震荡混匀10～30秒。
4.12000rpm室温离心2分钟。此时上清液将变得透明，中间层有白膜。小心转移上清液到一个新的1.5mL离心管中，避免触及中间层的白膜。
(三)基因组DNA收集：
1.将步骤(二)所得的上清转移到5mL或者10mL的离心管中，加入1.5倍体积的结合液III，颠倒数次混匀后，分多次上同一DNA吸附柱，每次上柱后均先室温放置2min，然后12000rpm离心1min，弃穿透液。(也可将上清平均转移到两个1.5mL离心管中，分别加入1.5倍体积的结合液III)
2.在吸附柱中加入500μL洗涤液，12000rpm离心1min，弃穿透液；重复洗涤一次。
3.再将吸附柱12000rpm离心30 s以甩干乙醇。
4.将吸附柱放入一个干净的1.5mL离心管中。在吸附柱中央加入50μL洗脱液(65～70℃预热)，室温静置2min。12000rpm离心1min。将穿透液重新加入吸附柱中央，12000rpm离心1min以洗脱更多基因组DNA。
5.检测DNA质量。将所得的基因组DNA保存于-20℃冰箱。
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